不同剂量美洲大蠊提取物抗小鼠肝纤维化的作用

【关键词】  肝硬化； 四氯化碳； 美洲大蠊； 小鼠

Prevention of CC14-induced liver fibrosis by periplaneta americana extract   LI Wu, DUAN Li-fang, HE Gui-qing, LIANG Yan-ping, ZHANG Yi-feng, YANG Hai-qiu, SHEN Zhi-qiang, HUANG Xue-hui.

【Key words】     Liver cirrhosis;    Carbon tetrachloride;    Periplaneta americana;    Mice

【First author’s address】   Department of Infectious Disease, the First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650032, China

Corresponding author: HUANG Xue-hui, Email: huangxuehui@ yahoo.cn

美洲大蠊提取物（APA）对实验性肝损伤有较好的保护作用，能抑制雏鸭体内鸭乙型肝炎病毒的复制[1]。为探讨APA对肝纤维化的防治效果，本研究用CCl4复制小鼠肝纤维化模型，观察不同剂量APA抗肝纤维化的作用及各剂量间疗效的差异。

一、材料与方法

1．实验动物：雄性昆明种小鼠，胎龄3～4周，体质量18～22g，由昆明医学院动物科提供。

2．动物模型的制备：20% CCl4橄榄油溶液按体质量5μl/g给小鼠颈背部皮下注射2次/周，连续6周。正常对照组动物仅皮下注射橄榄油溶液。

3．动物分组：60只小鼠随机分成正常对照组、模型组、APA高剂量组、APA中剂量组、APA低剂量组和秋水仙碱对照组，每组10只。造模当日即开始灌胃给药，1次/d，连续6周。空白对照组及模型组动物以蒸馏水按体质量0.02ml/g灌胃；秋水仙碱组以秋水仙碱（0.1mg/kg）0.01ml/g体质量灌胃；APA高、中、低剂量组分别给予APA 0.50、0.25、0.10g/kg灌胃。

4．观测指标与标本采集：观察动物的体质量、食欲、神态等一般状况。第6周末，先以乙醚吸入麻醉后摘眼球用毛细玻管眼眶取血供生物化学检测，再立即剖杀动物，取肝左叶中部、左叶及右上叶前部，进行组织病理检查。采用放射免疫法（按试剂盒说明书进行）测定血清透明质酸、层黏连蛋白、Ⅲ型前胶原、IV型胶原水平。采用全自动生物化学分析仪测定ALT、AST、总胆红素和白蛋白。

5．病理组织学检查：肝组织石蜡包埋，常规切片，HE及Masson染色，光镜下观察肝组织学改变及胶原纤维增生情况，按照《肝纤维化诊断及疗效评诂共识》的标准[2]，进行炎症活动度分级及肝纤维化分期。有2期以上肝纤维化形成，即确定肝纤维化模型复制成功。

6．统计学处理：采用两组间Student t检验对实验数据进行分析，等级资料用秩和检验，用SPSS13.0统计软件进行统计分析。

二、结果

1．小鼠一般情况：空白对照组处死前均存活，模型组实验中死亡1只。

2．APA对实验性肝纤维化小鼠肝功能的影响：APA各剂量组及秋水仙碱组转氨酶的升高均明显低于模型组。高、中剂量APA对肝纤维化小鼠转氨酶的升高有明显的降低作用，且优于秋水仙碱组，其中APA高、中剂量组的ALT、AST均低于低剂量组（P值均<0.05），但高、中剂量组之间差异无统计学意义（P>0.05）。模型组与药物组之间的白蛋白及总胆红素差异无统计学意义（表1）。

3．APA对实验小鼠肝纤维化指标的影响：APA各剂量组及秋水仙碱组血清中的透明质酸、层黏连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原均明显低于模型组，APA高、中剂量组的透明质酸、层黏连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原均低于低剂量组(P值均<0.01)，但高、中剂量组之间差异无统计学意义（表2）。

4．病理形态学表现：HE染色及Masson染色均提示，模型组肝组织损害严重，肝细胞明显肿胀、变性，其中多为脂肪变性，部分呈气球样变，肝小叶周围明显坏死，胶原增生显著，形成部分假小叶。APA高、中、低剂量组炎细胞浸润、肝细胞变性坏死及纤维增生均明显减少，未出现假小叶的形成。相比较而言，高、中剂量组纤维增生较少，局限于汇管区，低剂量组疗效稍差，纤维组织由汇管区向周围延伸，肝细胞变性坏死稍明显；秋水仙碱组:肝细胞变性坏死及炎细胞浸润较少，纤维增生明显减轻（图1，2）。

5. APA对小鼠肝脏炎症活动度分级及肝纤维化分期的影响：经秩和检验，APA高、中、低剂量组及秋水仙碱组与模型组小鼠的肝脏炎症活动度分级和肝纤维化分期的比较，组间差异有统计学意义（P<0.01）。APA各剂量小鼠的炎症活动度分级及肝纤维化分期均明显较模型组轻，APA高、中剂量组的炎症活动度分级及肝纤维化分期均较低剂量组轻（P<0.01），见表3。

三、讨论

中医药在抗肝纤维化方面越来越显示其独特优势，中药可以通过多途径、多环节、多靶点、多种细胞因子及细胞内信号分子的网络来发挥作用[3-5]。本研究中，我们观察了APA对CCl4所致小鼠肝纤维化模型中的作用，结果显示APA能降低CCl4肝纤维化小鼠的血清转氨酶、透明质酸、层黏连蛋白、Ⅳ型胶原和Ⅲ型前胶原水平，提示APA具有较好的抑制细胞外基质的合成，以及促进其降解的作用。通过病理肝纤维化程度分级分析可知，APA能明显改善受损肝脏的病理形态，降低纤维化程度。病理组织学HE及Masson染色结果发现模型组小鼠肝细胞损伤严重，肝纤维化程度严重，APA可明显改善小鼠肝纤维化程度，保护肝细胞损伤，提示APA对CCl4所致大鼠肝纤维化具有防治作用，至于其作用机制，本项目组将做进一步探讨。

参  考  文  献

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高永翔,扈晓宇,钟森,等.蟑螂提取物抗肝损伤及抗病毒作用探讨.国际中医中药杂志,2006,28:155-158.

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中华医学会肝病学分会肝纤维化学组.肝纤维化诊断及疗效评估共识.中华肝脏病杂志,2002,10:327-328.

[3]Cheng ML, Fu RQ. Changes of oxidation/antioxidation and the therapeutic effect of Handanganle in immune rat liver fibrosis induced by pig serum injevtion. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2006, 14: 217-218. (in Chinese)

程明亮,付荣泉.中药复方对猪血清免疫性肝纤维化肝中氧化及抗氧化的影响.中华肝脏病杂志,2006,14:217-218.

[4]Li X, Peng XD, Zhang WL, et al. Inhibiting effects of denshensu,baicalin,astragalus and Panax notoginseng saponins on hepatic fibrosis and their possible mechanisms. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2008, 16: 193-197. (in Chinese)

李欣,彭小东,张文利,等.四种中药单体的抗肝纤维化作用及其机制.中华肝脏病杂志,2008,16:193-197.

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徐列明.中医药治疗肝纤维化和肝硬化的临床实践.中华肝脏病杂志,2008,16:182-183.

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