不同剂量氯沙坦治疗大鼠门静脉高压性结肠病的效果

【关键词】  肝硬化； 高血压，门静脉； 肝静脉压力梯度； 氯沙坦

Effect of different doses of losartan on cirrhotic portal hypertensive colopathy in rats   HUO Li-juan, HAN Xiao-dong, TIAN Ling-lin.

【Key words】Liver cirrhosis; Hypertension, portal; Hepatic venous pressure gradient; Losartan

【First author’s address】   Department of Gastroenterology, First Clinical Medical College, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China

Email: mymail5296@ 163.com

门静脉高压性结肠病（PHC）的发病率约为40.6%[1]。霍丽娟等[2]用缬沙坦对PHC大鼠进行治疗，发现其对PHC大鼠结肠黏膜具有明显保护作用。氯沙坦作为缬沙坦的同类药物，对PHC治疗具有较好预期效果。

一、材料与方法

1. 主要药品及设备：氯沙坦购自杭州默沙东制药有限公司。BL410生物机能实验系统购自成都泰盟科技有限公司。

2. 动物模型的制备：将92只成年雄性Wistar大鼠（购自山西医科大学生理实验室的动物饲养室）随机抽取16只作为正常对照组，采用普通饮食，余76只大鼠采用复合因素法制作肝硬化模型，造模期间大鼠死亡23只[3]。造模后取8只大鼠检测模型成功情况。成模后将剩余模型大鼠随机分为4组：模型对照组（12只）、高剂量治疗组（11只，氯沙坦10mg·kg-1·d-1）、中剂量治疗组（11只，氯沙坦5mg·kg-1·d-1）、低剂量治疗组（11只，氯沙坦2.5mg·kg-1·d-1）；氯沙坦溶解于蒸馏水中灌胃，对照组以等量蒸馏水灌胃，共3周。

3. 测压步骤：治疗结束后，大鼠禁食12h，麻醉后，右颈部正中切口，行右颈总动脉插管测量平均动脉压（MAP）。肝静脉压测量参照套管测量法，测量楔形肝静脉压与游离肝静脉压，计算得出肝静脉压力梯度（HVPG）[4]。

4. 标本采集及检测：大鼠处死后取降结肠，对各组降结肠组织常规石蜡包埋、HE染色，观察各组结肠黏膜变化。光学显微镜下随机测量每张切片每个视野中5条微静脉的长径及短径，分别取其平均值，用这两个数的乘积表示微静脉扩张程度；每张切片随机抽取5个毛细血管，测量内表面面积，取平均值作为该标本毛细血管扩张程度。各组结肠组织常规处理后行透射电子显微镜观察。

5. 统计学分析：实验数据用均数±标准差（x-±s）表示，用SPSS13.0统计软件包行t检验、单因素方差分析（组间比较采用LSD法），以P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

1. 模型形成情况：造模8周后，取正常对照组大鼠6只，模型组大鼠8只，正常对照组大鼠肝脏表面光滑，质地较软，模型组大鼠肝脏表面可见小结节，质地较韧。光学显微镜下观察正常对照组肝脏小叶无异常，而模型组有假小叶的形成伴脂肪变性。两组大鼠的HVPG差异均有统计学意义（t＝ -7.696，P<0.01），MAP的差异无统计学意义（P＞0.05），见表1（略）。其中模型组2只大鼠在检测时，发生出血，数据未用。

2. 药物对肝静脉压力梯度的影响：治疗结束后，正常对照组大鼠无死亡，模型对照组死亡3只，高剂量治疗组死亡1只，低剂量治疗组死亡2只，中剂量治疗组无死亡。

在测量HVPG过程中，各组大鼠均有因测压时发生出血，相应大鼠的数据弃之不用。各治疗组与模型对照组相比较，HVPG差异具有统计学意义（F＝24.891，P<0.05），不同剂量治疗组间差异无统计学意义（P>0.05）。5组MAP值进行组间比较，各组与高剂量治疗组间比较，差异有统计学意义(P<0.05）；另外4组间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2（略）。

3. 结肠黏膜在光学显微镜下观察及图像分析结果：正常对照组结肠组织无异常。模型对照组可见黏膜上皮细胞坏死、脱落，腺体细胞排列不齐（图1）。黏膜层及黏膜下层可见微血管数量增多，静脉迂曲变形。各个剂量治疗组与模型对照组相比，病变减轻，腺体排列较整齐，以高、中剂量治疗组较明显（图2），低剂量治疗组仍可见部分腺上皮细胞坏死、脱落。各组黏膜下层微静脉面积（F＝16.887，P<0.01）、毛细血管内表面面积（F＝7.092，P<0.01）组间比较，差异有统计学意义。黏膜下层微静脉面积在模型对照组、治疗组均明显高于正常对照组（P<0.01），三个剂量治疗组也较模型对照组显著降低（P<0.05）；高、中剂量治疗组与模型对照组相比，毛细血管内表面面积显著降低（P<0.01），低剂量治疗组毛细血管内表面面积与模型对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。见表3（略）。

4. 结肠黏膜超微结构的观察：正常对照组黏膜层腺上皮细胞无异常。模型对照组结肠黏膜腺上皮细胞可见微绒毛断裂，染色质浓缩边集、线粒体肿胀、基质空化、嵴断裂消失、粗面内质网肿胀扩张、核糖体脱落（图3）。各个治疗组黏膜腺上皮细胞病变程度较模型对照组减轻（图4）。

三、讨论

门静脉高压是PHC发病的主要原因，即门静脉高压时，肠壁黏膜层及黏膜下层血液回流受阻，血管扩张被动性淤血，黏膜层及黏膜下层血供相对不足导致PHC的发生。在本研究中，模型对照组大鼠结肠黏膜层及黏膜下层静脉迂曲、扩张，静脉血管壁断裂，红细胞向血管外逸散，黏膜下层微静脉、小静脉面积增大，毛细血管内表面面积扩大，大鼠HVPG相对于正常对照组显著增高， 结肠黏膜层及黏膜下层微循环血流动力学改变，表明门静脉高压是PHC形成与发展中的重要因素。

国内外学者已将氯沙坦治疗门静脉高压应用于临床实验，并且对其降低门静脉压力的机制进行了研究。Castan~o等[5]对17例肝硬化合并门静脉高压的患者给予氯沙坦25mg/d，结果显示肝静脉压力梯度显著下降，全身血液动力学没有变化。De等[6]证实该药物降低门静脉压力的有效率高于传统药物普奈洛尔。其机制可能为：（1）阻断血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）与其受体（AT1）结合，降低肝内血管阻力。（2）阻断AngⅡ与肝星状细胞上AT1结合，抑制肌纤维样变性和表达细胞骨架蛋白，肝血窦阻力降低[7]。（3）减少转化生长因子（TGFβ）和胶原基因的表达，增加胶原酶活性，促进胶原降解[8]。（4）使肝组织AT1表达下调可减少AngⅡ靶点。氯沙坦通过降低压力使结肠黏膜层及黏膜下层血液回流阻力下降，血供增加，缺血缺氧缓解，细胞病变减轻，使结肠黏膜屏障功能得到恢复。本实验结果显示中剂量治疗组治疗效果优于低剂量治疗组，且对全身血流动力学的影响较小，可作为临床治疗的参考剂量。

参  考  文  献

[1]Yin CH, Liu XY. Portal hypertension intestine disease.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi, 2003, 11: 1569- 157l. (in Chinese)

尹朝晖,刘浔阳.门脉高压性肠病.世界华人消化杂志,2003,11:1569-1571.

[2]Huo LJ, Zhang Q. The effects of valsartan and propranolol on the colonic ultrastructure in rats with portal hypertensive colopathy. Zhonghua Xiaohua Zazhi, 2007, 27: 239- 242. (in Chinese)

霍丽娟,张清.缬沙坦、普萘洛尔对大鼠门脉高压性结肠病超微结构的影响.中华消化杂志，2007,27:239-242.

[3]Han DW, Ma XH, Zhao YC. A study on cirhosis model in rats. Shanxi Yiyao Zazhi, 1979, 8: 1-6. (in Chinese)

韩德五,马学慧,赵元昌.肝硬化动物模型的研究. 山西医药杂志,1979,8:1-6.

[4]Li XN. A new method of measure wedged hepatic vein pressure in rats. Xuzhou Yixueyuan Xuebao, 1997, 17: 384-385. (in Chinese)

李向农.介绍一种测量大鼠肝静脉楔入压的新方法.徐州医学院学报,1997,17:384-385.

[5]Casta G, Viudez P, Riccitelli M, et al. A randomized study of losartan vs propranolol: Effects on hepatic and systemic hemodynamics in cirrhotic patients. Ann Hepatol, 2003, 2: 36-40.

[6]De BK, Bandyopadhyay K, Das TK, et al. Portal pressure response to losartan compared with propranolol in patients with cirrhosis. Am J Gastroenterol, 2003, 98: 1371-1376.

[7]Huo LJ, Huang HF. The effect of angiotensin Ⅱ type l receptor blocker valsartan  in rats with portal hypertensive gastropathy. Zhonghua Xiaohua Zazhi, 2006, 26: 258-259. (in Chinese)

霍丽娟,黄会芳.缬沙坦降低大鼠肝硬化门静脉高压的实验研究.中华消化杂志,2006,26:258-259.

[8]Park DH, Baik SK, Choi YH, et al. Inhibitory effect of angiotensin blockade on hepatic fibrosis in common bile duct-ligated rats. Korean J Hepatol, 2007, 13: 61-69.

中华肝脏病杂志版权