高山红景天是中药制剂，主要有效成分为红景天甙、甙元酪醇、蛋白质、黄酮、有机酸、酚性化合物、甾类及微量元素等。本文观察红景天水煎剂对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和Ⅰ型胶原合成的影响，研究其防治肝纤维化的作用和机制。 材料与方法 一、材料 Wistar大鼠，雄性，体重180～ 二、方法 (一)HSC的分离、培养与鉴定按文献［1］所述并加以改进，大鼠经（1%戊巴比妥 4 ml/kg体重）腹腔麻醉后，先后门静脉插管输入D-hanks液及含酶灌注液，同时剪断下腔静脉放血，灌注20 min后，待肝组织软化后，小心分离肝脏，剪碎，酶消化振荡20 min过200目网后，滤液离心 (二)实验分组分为对照组、实验组和空白对照组。对照组（A）组：加4 ml/L血清的DMEM/IMDM（1∶1）培养液，不加红景天水煎剂。实验组分为6组：B组（培养液中加入红景天水煎剂到终浓度为0.5 mg/L）；C组（加入红景天水煎剂到终浓度为1.0 mg/L）；D组（加入红景天水煎剂到终浓度为2.0 mg/L）；E组（加入红景天水煎剂到终浓度为4.0 mg/L） ； F组(加入红景天水煎剂到终浓度为8.0 mg/L) ；G组(加入红景天水煎剂到终浓度为16 mg/L) 。空白对照组(H组)：不加细胞，其他条件与前相同。每组3复孔。另做2块完全一样的24孔板。HSC接种于24孔培养板后,生长至80%以上融合度用于实验,先弃去培养基，Hanks液冲洗两次，4 ml/L血清DMEM/IMDM培养液培养48 h同步化处理后加药，根据HSC分泌Ⅰ型胶原蛋白的时相关系收集培养24 h上清液进行Ⅰ型胶原蛋白ELISA法检测。 (三)ELISA法定量测定Ⅰ型胶原用 (四)MTT比色法检测不同浓度的红景天水煎剂对HSC增殖的影响。用前述方法制成浓度为2×104/ml细胞悬液接种于24孔培养板。12 h后细胞完全贴壁展开，用含10%小牛血清的DMEM培养液同步化细胞，每孔100 μl, 按上述分组处理后，另做2块完全一样的24孔板。将培养板移入CO2孵箱中，培养48 h后，每孔加入MTT溶液（5 mg/ml,PBS）50 μl, 三、统计学处理 各组数据以均数±标准差表示,用SPSS10.0统计软件进行组间方差分析,q检验. 结 果 一、HSC细胞的得率和纯度 用本法分离的HSC，其得率为5×106～1×107/肝，以0.04%锥虫蓝染色，细胞存活率在98%以上。原代培养的HSC desmin阳性在90%以上，传代培养后HSC desmin阳性在98%以上。 二、ELISA法检测HSC培养上清液Ⅰ型胶原蛋白结果 加入红景天水煎剂后，除B组外（P＞0.05），各组HSC细胞的Ⅰ型胶原蛋白分泌受到抑制，随着红景天水煎剂用量增加，抑制作用增强，呈明显的剂量效应关系（P＜0.05），表明红景天水煎剂能有效抑制Ⅰ型胶原蛋白分泌而起到抗肝纤维化的作用(见表1)。（略） 三、MTT比色法检测红景天水煎剂对HSC增殖的影响结果 加入红景天水煎剂后，除B组外（P＞0.05），各组HSC细胞的增殖受到抑制，随着红景天水煎剂用量增加，抑制作用增强，呈明显的剂量效应关系（P＜0.05），但D和 E组比较无统计学意义（P＞0.05），表明红景天水煎剂能有效抑制HSC的增殖分化而起到抗肝纤维化的作用(见表2)。（略） 讨 论 肝纤维化的发生是一个多因素相互促进、相互制约的复杂过程。目前尚无理想的治疗方案可以有效防治或逆转已形成的肝纤维化，而中医药在逆转肝纤维化及改善临床症状上展示了良好的前景。高山红景天系景天科红景天属，其根茎入药。研究指出，高山红景天具有抗肿瘤、抗疲劳、抗辐射、抗严寒和表2MTT法检测红景天水煎剂对HSC增殖的影响抗缺氧等多种功能，但应用于肝纤维化防治报道颇少。我们应用单方生药高山红景天水煎剂对大鼠HSC的增殖和Ⅰ型胶原的合成、分泌进行研究。结果显示，该药能够抑制肝星状细胞的增殖和Ⅰ型胶原的合成、分泌，并具有剂量依赖性。研究证实［2］，高山红景天水煎剂能够降低肝内ECM中LN、HA、PCⅢ、CⅣ而抑制CCl4诱导的实验性肝纤维化的形成和发展。本文进一步明确了高山红景天抗肝纤维化的机制可能通过抑制HSC增殖和胶原合成，使两者形成反馈调节。 参 考 文 献 1Kawada N. The hepatic perisinusoidal stellate cell.Histol Histopathol. 1997，12∶1069－1080. 2陈艳军,颜玉,张立志,等.高山红景天对实验性大鼠肝纤维化的抑制作用.黑龙江医药科学,2006,29∶3.
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