血吸虫性肝纤维化是晚期血吸虫病肝脏严重的病理改变。目前国内外尚无理想的抗纤维化药物。研究证实过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ)的配体具有抗肝纤维化的作用［1］，但其具体机制尚不完全明确 ，也鲜见其治疗血吸虫病肝纤维化的研究报道。本文研究PPARγ配体罗格列酮治疗小鼠血吸虫病肝纤维化血清肿瘤坏死因子－α(TNF－α)和 白介素－6 (IL－6) 含量的变化，探讨PPARγ配体在抗血吸虫病肝纤维化中的可能作用及其机制。材料与方法 一、实验动物 30只昆明小鼠，体重16～22 g，购于华中科技大学同济医学院动物实验中心。随机分为3组，每组10只,均皮下感染日本血吸虫尾蚴40条。感染对照组：感染尾蚴4周后灌服等量的生理盐水6周；吡喹酮治疗组：感染尾蚴4周后用吡喹酮500 mg/(kg·d)灌胃，杀虫治疗2 d后改为等量的生 理盐水灌胃治疗6周；罗格列酮治疗组：感染尾蚴4周后用吡喹酮灌胃（剂量同前），杀虫治疗2 d后用罗格列酮4 mg/(kg·d)灌胃治疗6周。最 后断颈法处死小鼠，取血清置于－20℃冰箱中保存待检。并取每组小鼠肝组织置于10％甲醛固定，制成石蜡切片，作病理学检测（HE染色）。 二、药品 罗格列酮片为葛兰素史克有限公司产品。 三、检测方法 血清TNF－α及IL－6水平的检测采用放射免疫法，放免药盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供。操作方法按说明书进行。 四、统计分析 结果以±s表示，统计学处理用t检验。结果 一、肝组织病理形态学变化 血吸虫尾蚴感染组小鼠，肝内汇管区及虫卵肉芽肿周围纤维增生明显，大部分虫卵肉芽肿出现坏死病灶及纤维化，肝血窦扩张充血，细胞颗粒变性，大量炎性细胞浸润。吡喹酮治疗组小鼠肝脏汇管区及肉芽肿内少量纤维组织增生，肝细胞颗粒变性少，可见炎性细胞浸润。罗格列酮治 疗组肝脏病变更轻，肝细胞排列清晰，少量炎性细胞浸润，肝脏汇管区及肉芽肿内纤维组织增生不明显。 二、小鼠血清TNF－α及IL－6检测结果 吡喹酮组及罗格列酮组TNF－α水平较感染对照组均显著降低(P<0.05), 其中罗格列酮组较吡喹酮组降低更明显(P<0.05)。罗格列酮组IL－6水 平明显低于吡喹酮组及感染对照组(P<0.05), 吡喹酮组与感染对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结果见表1。（表1略） 讨论 过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ 是一类由配体激活的核转录因子,属II型核受体超家族成员, 是重要的肝脏代谢功能调节分子，其功能改 变与一些肝脏疾病有相关性［2］。研究证实静止状态人类肝星状细胞（HSC）表达PPAR(，而活化状态的HSC表达明显减少,PPAR(在维持HSC作为静止状态的表型上具有重要作用，PPAR(表达减少与HSC激活密切相关［3］。HSC活化时，PPARγ表达和PPAR反应元件结合成分减少。在体外用 PPARγ配体可逆转这一反应。PPARγ及其配体在肝纤维化形成中的作用已成为肝纤维化研究领域里的一个新热点。但其具体机制尚不完全清楚。目前认为PPARγ配体作为PPARγ的激活剂，可抑制HSC增殖，减少肝内胶原积聚和增加肝内胶原酶活性［1］。 TNF－α是在肝纤维化研究中最早受到关注的细胞因子之一。它是一种很强的HSC有丝分裂原，可活化HSC细胞外信号调节激酶(ERK)通路和c－ jun、N－terminal kinase(JNK)通路，从而促进产生细胞外基质，导致肝纤维化的形成［4-5］。肝内IL－6来源主要是活化的HSC和肝成纤维 细胞。IL－6参与包括肝纤维化在内的许多病理过程。活化的HSC产生大量IL－6，而IL－6反过来刺激HSC增殖和合成胶原，使HSC呈持续活化状态，故IL－6被视为HSC活化的标志［6］。 本实验用日本血吸虫尾蚴感染建立血吸虫病肝纤维化模型，并在肝纤维化早期应用罗格列酮治疗，发现能明显减轻肝组织纤维化的形成，明显降低血吸虫病肝纤维化小鼠血清TNF－α及IL－6水平。本实验还显示吡喹酮治疗日本血吸虫病肝纤维化，也能降低TNF－α的含量。表明吡喹酮在驱虫治疗的同时能诱导一定的抗纤维化效应。如果在驱虫治疗的同时配合有效的抗纤维化药物治疗能明显提高血吸虫病治疗的疗效，减少肝纤维化的发生。 本研究显示，罗格列酮可显著降低血吸虫病肝纤维化小鼠血清TNF－α及IL－6含量而发挥抗纤维化效应。当然仅仅从抑制促纤维化因子的生成方面治疗肝纤维化是远远不够的。PPARγ及其配体在肝纤维化中的作用机制还有待进一步研究。 参考文献 1Yuan GJ, Zhang ML, Gong ZJ. Effects of PPARg agonist pioglitazone on rat hepatic fibrosis. World J Gastroenterol,2004, 10∶ 1047－1051. 2Everett L, Galli A, Crabb D. The role of hepatic peroxisome proliferatoractivated receptors(PPARs) in health and disease. Liver, 2000,20∶191－199. 3Zheng S, Chen A. Activation of PPAR gamma is required for curcumin to induce apoptosis and to inhibit the expression of extracellular matrix genes in hepatic stellate cells in vitro. Biochem J, 2004, 15∶149－157. 4Lian WJ, Zhang WD. Signal conduction mechanism of cell apoptosis induced by tumor necrosis factor. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi, 2000,8∶329－331. 5Lang A, Brenner DA, Rippe RA. Nuclear factor KAPPA B induced resistance to tumor necrosis factor alpha mediated apoptosis in hepatic stellate cells. Hepatology,1998,28∶437A. 6Kovalorich K, Deangelis RA, Li W, et al. Increased toxininduced liver injury and fibrosis in interleukin6deficient mice. Hepatology, 2000,31∶149－159. 上海《肝脏》杂志社版权 |