【关键词】 脂联素； 脂肪肝，非酒精性；幼兔 The relationship between adiponectin and nonalcoholic fatty liver disease in infant rabbits fed a fat-rich diet FANG Yan-lan, LIANG Li, FU Jun-fen. 【Key words】 Adiponectin; Fatty liver, non-alcoholic; Rabbit infant 【First author抯 address】 Children抯 Hospital of Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, China Corresponding author: LIANG Li, Email: zdliangli@163.com 脂联素是近来发现的脂肪组织产生最多的基因产物，由脂肪细胞分泌并存在于血液循环中。以前的临床研究中发现，诊断为NAFLD的肥胖儿童血清脂联素水平低于单纯肥胖儿童[1]。拟通过建立幼兔的NAFLD模型来研究儿童NAFLD的特点以及其与血清脂联素之间的关系。 一、材料与方法 1．材料：新西兰纯种雄性大耳兔（浙江大学医学院动物中心）、胆固醇（上海思吉生物制品有限公司）、猪油（杭州联华超市成品）、普通兔饲料（浙江大学医学院动物中心）、脂联素试剂盒（美国BPB Biomedicals公司）。 2. 方法：（1）动物分组与饲养：32只新西兰大耳兔（1月龄）观察7d后，10只予以普通饲料喂养12周作为对照组；22只予以高脂饲料（含10%猪油、2%胆固醇）作为模型组，喂养8周后再分为两组，每组11只，一组8周时处死，另一组继续以高脂饲料喂养至12周处死；每只兔自由进食，单笼饲养，饮水不限。（2）血脂、转移酶及体重测定：饲养8周和12周末，称取幼兔空腹体重（BW），并用3%的戊巴比妥钠溶液按1ml/kg体重于耳缘静脉注射麻醉后，经左颈外静脉取空腹血5ml，静置30min后离心取血清，在Backman CX4全自动生化仪上测定血清TC、TG、ALT及AST。（3）血清脂联素的测定：用ELISA法测定血清脂联素的浓度，血清分离后置-80℃冰箱保存备测。（4）动物处死及肝脏标本的留取：经耳缘静脉注射追加3%戊巴比妥钠溶液处死。在腹部正中做一长约6～7cm的纵切口，将肝脏完整地分离至体外，迅速用冰等渗盐水冲洗干净，晾干后称重、记录，计算肝指数（肝湿重/体重）。取肝右叶约1cm×1cm×0.5cm大小的组织块固定于10%的中性甲醛溶液中，以备组织学检查。（5）HE染色和组织学诊断：对肝脏标本进行HE染色，并按照NAFLD的病理诊断标准进行诊断。 3. 统计学处理：采用SPSS11.5软件分析。连续性正态分布计量资料以均数±标准差表示，非正态分布的变量经对数转换后使之正态化后再分析；计数资料以列联表Fisher精确检验法；组间均数的比较采用单因素方差分析（两两比较采用LSD方法或非配对的t检验），脂联素相关因素分析采用多元回归方法。 二、结果 1. 组织学结果：实验组兔子均达到NAFLD的诊断要求，并且以NASH为多。病理变化中包括有脂肪变性、气球样变、小叶内、汇管区炎症浸润和点状坏死。见图1～4。 2. 血清学结果：（1）与对照组相比，8周组的血清脂联素较低（P＜0.05)，但是12周组的差异无统计学意义（P＝0.058）。8周组、12周组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）对照组的肝指数、ALT、AST、TG、TC、肝细胞脂肪浸润、肝脏炎症活动度计分都低于8周组和12周组（P＜0.05），但是8周组与12周组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。ALT/AST在三组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。（3）血清脂联素和其他变量之间的相关性分析：以血清脂联素为自变量，肝脏脂肪浸润程度、炎症活动度计分、肝指数、ALT、AST、TG、TC为应变量进行多元逐步回归分析。发现TC与肝脏脂肪浸润程度是幼兔血清脂联素水平的独立决定因素。血清脂联素水平与TC呈负相关，P＝0.006；与肝脏脂肪浸润程度负相关，P＝0.038。炎症活动度计分、肝指数、ALT、AST、TG被排除在方程式之外。 三、讨论 NAFLD是一种以肝细胞内脂肪贮积、肝细胞脂肪变性为特点的临床病理综合征。随着病情的进展,疾病谱包括单纯性脂肪肝、NASH、肝纤维化、肝硬化甚至终末期肝病[2]。而NASH是整个病程朝不良预后发展的关键，虽然目前国内外对于诊断NASH的最基本组织学依据还没有一致的意见，但普遍认为脂肪变性混合单核和（或）多核巨噬细胞浸润，肝细胞肿胀（气球样变性）和点状坏死是非酒精性脂肪肝炎最常见的损害[3，4]，而本实验中模型组的各个标本在HE染色下光镜观察都包括了以上损害，并且也符合了细胞变性以3区为主的NAFLD特点[3]，因此我们成功地建立了NAFLD的动物模型。 脂联素是一种近来发现的由脂肪组织特异性分泌的脂肪细胞因子，与其他脂肪细胞因子相反的是，代谢综合征患者表现为低血清脂联素水平。在本实验中我们发现模型8周组的血清脂联素较对照组低（P＝0.034），与之前我们所做的临床实验以及国外的一些研究结果相符[1，4]。虽然模型12周组血清脂联素较8周组略上升,与对照组相比较差异无统计学意义（P＝0.058），但是P值比较接近0.05，且12周组与8周组的所有观察指标差异均无统计学意义，因为没有相关的实验报道，因此尚不能排除随着喂养时间的延长，血清脂联素水平能否上升的可能性。 在本研究中，未发现血清脂联素水平与肝功能、肝脏炎症积分之间有明显的相关性，而既往的临床实验也没有类似的发现。我们在将血清脂联素水平与其他因素进行多元回归分析时发现,血清脂联素水平与TC呈负相关，既往临床实验中我们发现血清脂联素水平和HDL-C水平呈正相关，说明血清脂联素水平与脂代谢密切相关。国外有报道认为在成年女性中血清脂联素水平与甘油三酯水平相关，考虑是否与选择的实验对象性别不同有关[5]。Xu等[6]报道给予ob/ob非酒精性脂肪肝小鼠重组脂联素能降低血糖，逆转胰岛素抵抗，在不改变饮食摄入的情况下持续体重下降,而且还能改善肝肿大、脂肪变性和ALT上升。提示脂联素可能对防止NAFLD的发生有一定保护作用。 组织学肝细胞脂肪浸润程度一定程度上代表了肝脂肪含量，之前国外有文献报道血清脂联素水平与肝脂肪含量成负相关[7]，我们在以往的临床研究中发现血清脂联素水平与BMI和NAFLD呈负相关（P值分别为0.001和0.017）,动物实验中又发现血清脂联素水平与肝细胞脂肪浸润程度成负相关。这些结果提示脂联素能在一定程度上反映肝脏脂肪变性的严重度。血清脂联素的测定可能有助于评估肥胖儿童NAFLD的发生。 参 考 文 献 [1]Fang YL, Liang L, Zou CC, et al. The relationship between serum adiponectin level and non-alcoholic fatty liver disease in obese children. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2006, 14: 767-769. 方燕兰,梁黎,邹朝春,等.肥胖儿童血清脂联素水平与非酒精性脂肪性肝病的关系.中华肝脏病杂志,2006,14:767-769. [2]Grant LM, Lisker-Melman M. Nonalcoholic fatty liver disease. Ann Hepatol, 2004, 3: 93-99. [3]Neuschwander-Tetri BA, Caldwell SH. Nonalcoholic steatohepatitis: summary of an AASLD Single Topic Conference. Hepatology, 2003, 37: 1202-1219. [4]Asayama K, Hayashibe H, Dobashi K, et al. Decrease in serum adiponectin level due to obesity and visceral fat accumulation in children. Obes Res, 2003, 11: 1072-1079. [5]Musso G, Gambino R, Biroli G, et al. Hypoadiponectinemia predicts the severity of hepatic fibrosis and pancreatic Beta-cell dysfunction in nondiabetic nonobese patients with nonalcoholic steatohepatitis. Am J Gastroenterol, 2005, 100: 2438-2446. [6]Xu A, Wang Y, Keshaw H, et al. The fat-derived hormone adiponectin alleviates alcoholic and nonalcoholic fatty liver diseases in mice. J Clin Invest, 2003, 112: 91-100. [7]Tietge UJ, Boker KH, Manns MP, et al. Elevated circulating adiponectin levels in liver cirrhosis are associated with reduced liver function and altered hepatic hemodynamics. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2004, 287: E82-89. 《中华肝脏病杂志》版权 |