【摘要】目的 建立血清半胱氨酸蛋白酶抑制物C（Cystatin C，Cys C）的定量ELISA检测方法，探讨血清Cys C水平在肝肾综合征（HRS）早期诊断中的价值。方法 用ELISA法测定81例常规检查肾功能正常的肝硬化患者和26例健康体检者的血清Cys C水平，同时检测其血肌酐（Scr）、尿素氮(BUN)及尿肌酐（Ucr），算出校正24 h肌酐清除率(Ccr)作为肾小球滤过率标准，40≤Ccr＜80 ml·min-1·1.73 m-2的肝硬化患者被列为亚临床HRS组。结果 亚临床HRS组血清Cys C浓度明显高于单纯肝硬化组（P＜0.05）；而Scr、BUN在两组的差别无统计学意义。Cys C与Ccr相关性比Scr与Ccr相关性好（r=－0.91对r=－0.72，P＜0.05）；受试者工作特征曲线（ROC）分析显示Cys C曲线优于Scr。结论 血清Cys C较Scr、BUN能更敏感地检测出肝硬化患者的轻度肾功能损害，可作为识别亚临床HRS的一项新指标。 【关键词】Cystatin C； 亚临床肝肾综合征； 早期诊断； 受试者工作特征曲线（ROC） Diagnostic value of serum cystatin C in detecting subclinical hepatorenal syndrome in patients with liver cirrhosisJI Rengbin, HUANG Qun, WAN Lagen, et al.Ningbo Liver Desease Hospital, Ningbo 315010, China 【Abstract】Objective To set up a new quantitative determination method of assaying serum cystatin C(Cys C) concentration by means of Enzymelinked immunoadsordent assay (ELISA), and to investigate the diagnostic value of serum Cys C as a marker of detecting subclinical hepatorenal syndrome (HRS) in patients with liver cirrhosis. Methods 81 patients with liver cirrhosis were divided into Group 1 ［creatitnine clearance (Ccr)≥80 ml·min-1·1.73 m-2, n=43］ and Group 2subclinical HRS group (40≤Ccr＜80 ml·min-1·1.73 m-2， n=38). Serum Cys C, Serum creatinine (Scr) and BUN of them were assayed and compared with those of 26 healthy subjects as controls. Serum Cys C was measured by ELISA. Results Serum Cys C concentration was significantly higher in patients with liver cirrhosis than that in control group ［(3.15±1.43) mg/L vs (2.08±0.10) mg/L, P＜0.01］, and its levels in Group 2 was also significantly higher than that in Group 1 ［(3.56±2.01) mg/L vs (2.78±0.78) mg/L, P＜0.05)］, while there were no significant difference in Scr and BUN between two groups. The correlation of Cys C with Ccr was stronger than Scr with Ccr (r=-0.91 vs r=-0.72, P＜0.05). Receiveroperating characteristics (ROC) analysis showed that the ROC curve was significantly better for Cys C than that for Scr. Conclusion Serum Cys C detection could detect slight renal dysfunction in cirrhotic patients with subclinical HRS, and may be more sensitive than Scr and BUN. 【Key words】Cystatin C; Hepatorenal syndrome; Subclinical; Diagnosis; Receiveroperating characteristics 肝肾综合征（HRS）是肝硬化常见的并发症，一旦确诊，治疗相当困难，预后极差。尽早识别肝硬化患者的轻度肾功能异常即亚临床肝肾综合征，显得尤为重要。然而，常规肾功能检查往往导致漏诊。本研究旨在探讨血清Cys C能否作为一项更灵敏的检测亚临床HRS的指标。 材料与方法 一、研究对象 肝硬化患者81例，均为我院2003年2月—10月的住院病人，男53例，女28例，平均年龄48.6岁（15～80岁）。经临床、B超、CT、胃镜、血液生化等检查确诊为肝硬化（肝炎肝硬化45例，酒精性肝硬化26例，血吸虫肝硬化5例，隐源性肝硬化5例），常规肾功能检查均正常。按校正24 h内生肌酐消除率(Ccr)值分为二组：单纯肝硬化组43例，Ccr≥80 ml·min-1·1.73 m-2；亚临床HRS组38例，40≤Ccr＜80 ml·min-1·1.73 m-2。26例健康体检者作为对照组，男17例，女9例，平均年龄46.3岁（24～66岁）。各组间性别、年龄均无统计学差异。肝硬化诊断参考2000年9月西安会议制定病毒性肝炎防治方案标准，亚临床HRS诊断参考1996年国际腹水俱乐部（IAC）推荐的HRS诊断标准和文献报道，血清肌酐(Scr)＜133 μmol/L且40≤Ccr＜80 ml·min-1·1.73 m-2肝硬化患者被列为亚临床HRS。剔除标准包括高血压、糖尿病、原发性肾病、恶性肿瘤、术后、甲状腺功能减低、急性出血、尿潴留以及近1周应用利尿剂或肾毒性药物者。 二、标本收集 取晨空腹静脉血两管（3 ml/管），一管检测肝肾功能， 另一管离心20 min（2000 r/min）分离出血清，置-30℃冰箱待测Cys C，同时，留取当天24 h尿（加防腐剂处理），检测24 h尿量、尿肌酐(Ucr)。 三、检测方法 血清Cys C采用ELISA方法测定，试剂盒购自上海德波公司。Scr、Ucr和BUN用HITACHI7600010型全自动生化仪，分别以苦味酸法和酶法检测，Scr、Ucr试剂盒购自北京中生北控生物科技股份有限公司，BUN试剂盒购自上海科华－东菱诊断用品有限公司。计算出24 h Ccr，并按体表面积校正，作为肾小球滤过率标准。 四、统计学处理 数据用均数±标准差表示，两组间比较用t检验；指标间作相关分析,其诊断性能比较用受试者工作特征曲线（ROC）分析法；率的比较用χ2分析。所有数据均采用SPSS 11.0软件包处理。 结果 一、肝硬化患者血清Cys C、Scr与BUN水平变化 肝硬化组血清Cys C浓度明显大于正常对照组（P＜0.01），而Scr、BUN在两组间差别无统计学意义。 表1（略） 二、单纯肝硬化组与亚临床HRS组各指标比较 亚临床HRS组血清Cys C浓度明显大于单纯肝硬化组，差别具有统计学意义（P＜0.05）；Scr、BUN在两组间差别无统计学意义。见表2。 三、血清Cys C、Scr与Ccr的相关性比较 血清Cys C和Scr分别与Ccr呈负相关，Cys C与Ccr的相关性较Scr与Ccr的相关性好（r=－0.91对r=－0. 72，P＜0.05）。 表2（略） 四、ROC分析 由ROC分析得知，Cys C和Scr的最佳截断点为2.96 mg/L和74.5 μmol/L, 此时其灵敏度和特异度分别为75％、77％和71％、67％；Cys C和Scr的曲线下面积（AUC）分别为0.831、0.698，P值均小于0.01。提示Cys C的诊断性能优于Scr；而BUN的AUC为0.493，小于0.5，诊断价值不大。 讨论 引起HRS的最后关键环节是肾动脉显著收缩导致肾小球滤过率(GFR)降低，以敏感指标检测GFR轻微改变，有望识别亚临床HRS。目前诊断肾功能早期损害的方法主要有：（1） 放射性核素物质、菊粉清除率，为诊断金指标，但价格昂贵，需一定的仪器设备，且有放射性；后者操作复杂，难以作为临床上的常规测定方法；（2） Ccr是反映GFR的敏感指标，准确性接近菊粉清除率，但易受诸多因素影响，且要留取24 h尿，操作复杂，不适宜门诊使用；（3） 核素肾动态显像是检测肾功能早期损害的较好方法，但往往肿大的脾脏与左肾重叠，使肾脏兴趣区的计数增高，引起假象；（4） 彩色多谱勒超声检测肾动脉血流阻力指数，可较敏感地反映肾动脉收缩所导致的GFR轻微改变，但设备昂贵，操作技术要求较高，不易推广；（5） 尿微量蛋白和尿酶的测定，β2微球蛋白、α1微球蛋白、视黄醇结合蛋白和N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）也能较敏感地反映肾功能早期损害，但在某些病理状态下，如急性感染、肝病时，其生成速度加快，不能很好地反映肾损害的真实情况。 Cys C是一种低分子量的非糖基化碱性蛋白质，含有120个氨基酸，相对分子质量为13 359，其基因是“管家基因”，即此基因在所有组织恒定持续转录及表达。Cys C由有核细胞产生，其生成速度稳定，在生理环境中带正电荷，血中Cys C能自由地被肾小球滤过而不被肾小管重吸收和分泌, 所以血清Cys C浓度主要由GFR决定，且与年龄、性别、胆红素、肌肉量、感染等因素无关，是一项反映肾小球滤过功能的理想指标。 近来文献报道血清Cys C在原发性肾病、糖尿病肾病、高血压、肿瘤化疗等不同肾病及肾移植中，其评价轻度GFR下降具有更高的敏感性，有可能取代Scr和Ccr应用于临床［1，2］。血清Cys C浓度与儿童慢性乙型肝炎及肝纤维化程度无关［3］；血清Cys C测定在肝硬化、肝肾综合征方面的应用国外报道很少［4，5］，国内鲜见报道。 本研究结果显示，肝硬化患者血清Cys C浓度明显大于正常对照组，而Scr和BUN无显著差异；在亚临床HRS组中，血清Cys C浓度明显高于单纯肝硬化组。提示血清Cys C比Scr和BUN更敏感地反映GFR改变，特别是对于亚临床HRS早期的轻微肾损害，与Gerbes等报道相符［4，5］。相关分析发现，Cys C与Ccr相关性比Scr与Ccr的相关性好；由ROC分析得知，Cys C的诊断灵敏度、特异度均优于Scr，且Cys C的ROC曲线下面积大于Scr，均提示Cys C对于亚临床HRS的诊断性能优于Scr。血清Cys C或许可作为识别亚临床HRS的一项新指标，且其采用定量ELISA检测法简易、准确，值得推广。 参考文献 1Hayashi H, Nitta K, Uchida K, et al. Clinical assessment of serum cystatin c as a marker of glomerular filtration rate in patients with various renal diseases. Clin Exp Nephrol,2000,4∶133-136. 2Chantrel F, Agin A, Offner M, et al. Comparison of cystatin c versus creatinine for detection of mild renal failure. Clin Nephrol,2000,54∶374. 3Lebensztejn DM, Skiba E, Kaczmarski M, et al. Serum cystatin C concentration does not predict advanced liver disease in children with chronic hepatitis B. Clinica Chimica Acta, 2004,347∶227-228. 4Gerbes AL, Gülberg V, Bilzer M, et al. Evaluation of serum cystatin C concentration as a marker of renal function in patients with cirrhosis of the liver. Gut,2002,50∶106-110. 5Orlando R, Mussap M, Plebani M, et al. Diagnostic value of plasma cystatin C as a glomerular filtration marker in decompensated liver cirrhosis. Clin Chem, 2002,48∶850-858. 《肝脏》杂志社版权 |