【关键词】 脂肪肝，酒精性； 胰岛素抗药性； 吡格列酮 Preventive effects of pioglitazone on rat fatty liver induced by a high fat diet XU Ping, LI You-ming, YU Chao-hui, XU Lei, XU Gen-yun. 【Key words】 Fatty liver, nonalcoholic; Insulin resistance; Pioglitazone 【First author抯 address】 Department of Gastroenterology, First Affiliated Hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, China Corresponding author: LI You-ming, Email: zlym@zju.edu.cn 非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是临床常见肝病之一，随着生活方式及膳食结构的改变，NAFLD的发病率明显增高。其发病机制目前尚不明确，有研究认为胰岛素抵抗（IR）是导致NAFLD的重要病因之一。吡格列酮作为过氧化物酶体增殖物激活受体γ的高亲和力激动剂，能明显增强组织对胰岛素的敏感性。我们通过高脂饮食建立NAFLD的动物模型，用吡格列酮进行干预，探讨IR与NAFLD的关系，评估吡格列酮对NAFLD的预防作用。 一、材料与方法 1. 实验动物: 雄性SD大鼠36只，体重80～ 2. 主要试剂：胆固醇购自华东医药股份有限公司，蛋黄粉购自长兴艾格生物制品有限公司，葡萄糖液体试剂盒购自上海申能－德赛诊断技术有限公司，天冬氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒购自北京柏定生物工程有限公司，胰岛素及肿瘤坏死因子（TNF）α测定试剂盒购自北京北方生物技术研究所。盐酸吡格列酮片由天津武田药品有限公司赠送。 3. 动物模型建立及分组: 将大鼠以每组12只随机分为：（1）对照组，普通饮食喂养8周；（2）模型组，高脂饮食喂养8周，即在基础饲料（80.5%）中加入2%高胆固醇、7%猪油、10%蛋黄粉以及0.5%胆盐；（3）药物预防组，喂饲高脂饮食同时加用吡咯列酮4mg.kg-1.d-1灌胃8周。 4. 标本处理: 大鼠隔夜禁食，次日股动脉采血后处死， 全血3000r/min离心3min分离血清，密封 5.观察指标及测定方法：日本日立7600全自动生化仪测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、AST、碱性磷酸酶（ALP）、血糖。TNFα、胰岛素采用放射免疫法测定。计算IR指数（IR指数=血糖×胰岛素/22.5）[1]。肝组织病理学检查由有经验的病理科医师盲法阅片，脂肪变性和炎症活动度评分标准参见文献[2]。 6. 统计学处理：资料以x-±s表示，采用SPSS11.0统计软件分析，连续变量采用单因素方差分析，定性变量采用秩和检验。 二、结果 1．一般情况及病理学变化：见表1。实验过程中，模型组大鼠较对照组体重增加迅速，肝湿重和肝指数明显增高（P<0.05）；药物预防组较模型组体重无明显变化，肝湿重和肝指数明显降低（P<0.05）。对照组大鼠肝脏肉眼观察肝色较红、边缘锐利、质韧；模型组大鼠肝呈黄褐色，可见白色斑点，体积明显增大，边缘钝，质地软；药物预防或治疗组大鼠外观介于二者之间。对照组大鼠肝小叶清晰，肝细胞索排列整齐，偶见小泡性脂肪滴空泡（图1）。与对照组比较，模型组8周末肝细胞出现典型脂肪变性，肝小叶内炎症细胞浸润明显，而汇管区炎症无明显变化（图2）。药物预防组与模型组比较，脂肪变性及肝小叶内炎症明显减轻（图3）。 2．血清肝酶谱、TNFα、血糖、胰岛素及IR指数变化：模型组与对照组比较，血清ALT、AST、ALP及TNFα水平显著升高（P<0.05）；药物预防组与模型组比较，血清ALT、ALP显著降低（P<0.05），AST和TNFα有下降趋势。模型组与对照组比较，血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数有升高趋势；药物预防组与模型组比较，血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数有降低趋势。见表2。 三、讨论 有学者采用高胰岛素正常葡萄糖钳夹试验研究显示，NAFLD存在IR[3，4]。IR导致肝细胞脂肪沉积，促进肝脏发生氧化应激，引起脂肪性肝炎，并激活肝星状细胞，形成脂肪性纤维化和（或）肝硬化。同时，脂肪肝亦促进高胰岛素血症和IR，并诱导脂质过氧化，加剧肝细胞炎症坏死和纤维化[5]。 本实验参照文献[6]方法，采用高脂饮食成功建立大鼠NAFLD模型。8周末模型组肝细胞出现典型脂肪变性，并伴有肝小叶内炎症细胞浸润，血清ALT、AST、ALP水平较对照组增高，血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数亦有增高趋势，提示IR在脂肪肝发生发展过程中可能起一定作用。 格列酮类是具噻唑烷-2，4-二酮基本结构的化合物，作为过氧化物酶体增殖物激活受体γ的高亲和力激动剂，能明显增强组织对胰岛素的敏感性[7]。Sanyal等[8]用吡格列酮联合维生素E治疗非酒精性脂肪性肝炎患者，发现肝组织脂肪变、气球样变和Mallory小体均有明显改善。国外大鼠实验显示，吡格列酮(3mg.kg-1.d-1)可抑制肝星状细胞激活，减少细胞外基质的生成，延缓四氯化碳诱导大鼠肝纤维化生成[9]。本实验结果显示，吡格列酮预防组大鼠肝脏病理改变较模型组减轻，肝指数及血清ALT、ALP水平低于模型组，血清AST、胰岛素水平及胰岛素抵抗指数亦有下降趋势，提示吡咯列酮具有预防大鼠NAFLD发生发展的作用。模型组TNFα水平显著高于对照组，吡格列酮预防组TNFα水平有下降趋势，提示吡格列酮对脂肪肝的预防作用可能与调节炎症因子水平有关,其临床应用价值及作用机制值得进一步探讨。 参 考 文 献 1Bonora E, Targher G, Alberiche M, et al. Homeostasis model assessment closely mirrors the glucose clamp technique in the assessment of insulin sensitivity: studies in subjects with various degrees of glucose tolerance and insulin sensitivity. Diabetes Care, 2000, 23: 57-63. 2Dixon JB, Bhathal PS, Hughes NR, et al. Nonalcoholic fatty liver disease: Improvement in liver histological analysis with weight loss. Hepatology, 2004, 39: 1647-1654. 3Marchesini G, Brizi M, Bianchi G, et al. Nonalcoholic fatty liver disease: a feature of the metabolic syndrome. Diabetes, 2001, 50: 1844-1850. 4Sanyal AJ, Campbell-Sargent C, Mirshahi F, et al. Nonalcoholic steatohepatitis: association of insulin resistance and mitochondrial abnormalities. Gastroenterology, 2001, 120: 1183-1192. 5Lu LG, Zeng MD. The role of improving insulin-resistant in the treatment and prevention of nonalcoholic fatty liver disease. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2003, 11: 113. 陆伦根，曾民德.改善胰岛素抵抗在非酒精性脂肪性肝病防治中的作用.中华肝脏病杂志,2003,11:113. 6Chen SQ, Liu Q, Sun H, et al. Establishing a rat insulin-resistant fatty liver model. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2005, 13: 105-108. 陈世清，刘杞，孙航,等.脂肪肝胰岛素抵抗大鼠模型的建立.中华肝脏病杂志,2005,13:105-108. 7Zhao CY, Jiang LL. Peroxisome proliferators-activated receptor in liver disease. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2003, 11: 382-384. 赵彩彦，姜玲玲.过氧化物酶体增殖物激活受体与肝病的关系.中华肝脏病杂志，2003,11:382-384. 8Sanyal AJ, Mofrad PS, Contos MJ, et al. A pilot study of vitamin E versus vitamin E and pioglitazone for the treatment of nonalcoholic steatohepatitis. Clin Gastroenterol Hepatol, 2004, 2: 1107-1015. 9Galli A, Crabb DW, Ceni E, et al. Antidiabetic thiazolidinediones inhibit collagen synthesis and hepatic stellate cell activation in vivo and in vitro. Gastroenterology, 2002, 122: 1924-1940.
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