射频联合亚砷酸治疗兔肝VX2肿瘤的疗效观察

【关键词】  肝肿瘤； 亚砷酸盐类； 兔； 射频

The effect of radiofrequency ablation combined with arsenites on rabbit liver VX2 tumors  ZHANG Meng-hui, KONG Xian-bing, WANG Qiao-ling, HUANG Xiao-ling, WANG Hui, GUO Ai-hong.

【Key words】     Liver neoplasms;   Arsenites;   Rabbit;   Radiofrequency ablation

【First author抯 address】   Jinan Fourth People抯 Hospital, Jinan 250031,China

Email: zhmhui@eyou.com

射频（RFA）是肝癌治疗的一种新手段，疗效确切[1]。临床研究发现，对于直径大于5cm的恶性肿瘤治疗不彻底是RFA所面临的一大难题[2，3]。我们采用射频联合亚砷酸局部治疗兔肝VX2肿瘤，通过观察肿瘤体积、转移和荷瘤兔存活时间的影响探讨联合治疗的安全性及高效性。

一、材料与方法

1．实验动物及材料：新西兰大白兔60只，雄性，兔龄3～5个月，体重2.5～3.0kg，由重庆医科大学实验动物中心提供,采用组织块种植法制作VX2荷瘤兔。亚砷酸注射液，哈尔滨伊达药业有限公司惠赠。多极射频治疗仪，LDRF-120S，四川绵阳产。超声仪LOGIO9型,美国GE公司产品。

2. 方法：将移植成功荷瘤兔随机分为4组，即对照组、射频组、亚砷酸组和联合组，每组15只。于第2周时进行治疗处理。治疗后第2周时，每组处死7只兔，测肿瘤的最小径（a1）与最大径(b1)，计算肿瘤体积及肿瘤体积抑制率。肿瘤体积计算公式为：肿瘤体积=a×b2/2［4］；由肿瘤体积计算肿瘤体积抑制率（%），计算公式为：肿瘤体积抑制率=（对照组平均体积-实验组体积）/对照组平均体积×100%。详细记录肝内转移以及肺、腹腔淋巴结转移情况，包括转移瘤的大小、数目和位置。肝肿瘤及肿瘤邻近的组织进行苏木素-伊红（HE）染色光镜观察。其余观察存活期,于术前、术后1、3、7d和14d进行超声学检查，测肿瘤的最小径（a2）与最大径(b2)。计算肿瘤体积及肿瘤体积抑制率，公式同上。

3. 统计处理：数据用x-±s表示。采用SAS8.01统计软件分析，以P<0.05为差异有统计学意义。用Kaplan-Meier法计算存活率，组间进行Log-rank检验。

二、结果

1．一般形态学观察：治疗第2周时，HE染色光镜下可见对照组肿瘤细胞呈圆形、棱形或不规则形，细胞体积较大，细胞质较少，核大、深染，细胞排列紊乱，可见实体样结构，间质少，呈浸润性生长，周围无包膜结构（图1）。射频治疗及联合治疗病灶发生凝固性坏死（图2），内有多少不等的纤维组织，外面有纤维瘢痕组织包裹（图3）。凝固灶周围可以见到血管栓塞。有慢性炎症反应，形成慢性炎症瘢痕，凝固灶周边有成簇的巨噬细胞、单个巨细胞以及异物巨细胞。除此之外可见脂肪变性（图4）、钙化（图5）。偶见增生的幼稚胆管。治疗不彻底时在治疗灶内可见残留的肿瘤细胞，残留细胞多靠近较大的血管（图6）。在治疗灶周围纤维化组织的包裹可见到肿瘤复发（图7，8）。亚砷酸治疗后可见治疗灶发生凝固性坏死，纤维组织瘢痕组织包裹不明显，内有散在巨噬细胞，少量纤维组织。

2．联合治疗的安全性：联合治疗组治疗后丙氨酸氨基转移酶第1天比术前明显升高，但平均值在正常范围内。第3天下降，接近术前水平（P>0.05）。第7天恢复至术前，第14天正常或稍低。射频组变化同联合组变化，组间差异无统计学意义。亚砷酸组治疗前后差异无统计学意义。表明联合治疗和射频治疗均有一过性肝功能损害。对照组肝功能不断升高。

3．联合治疗对兔肝VX2肿瘤体积、转移影响：（1）二维超声所测算的肿瘤体积显示联合治疗和射频治疗后第1天肿瘤体积稍微增大，与治疗前相比差异无统计学意义；然后逐渐缩小，而对照组肿瘤体积逐渐增大（图9）。治疗14d时计算的各组兔肝VX2肿瘤体积和肿瘤体积抑制率。联合组肿瘤体积水平小于其他各组，差异有统计学意义（P<0.05）；射频组肿瘤体积小于亚砷酸组，差异有统计学意义（表1）。 结果表明，联合治疗能明显缩小肿瘤体积，射频和亚砷酸具有协同效应。（2）治疗14d时各组的脏器总转移率，联合组为19%，明显低于其他３组。射频组脏器转移率38.1%，亚砷酸组脏器转移率63.3%，对照组62.4%发生不同脏器的转移。脏器转移以肺转移最多，其次是肝脏和淋巴结。

4. 联合治疗对荷瘤兔存活时间的影响：各组荷瘤兔处理后的实际存活时间，用Kaplan-Meier法计算各组存活率，并绘制存活率曲线，见图10。各组存活率曲线两两之间进行Log-rank检验，结果显示：各组间存活率P＜0.05，联合组存活率高于其他各组，差异有统计学意义（P＜0.05）；射频组存活率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；亚砷酸组实际存活时间高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

三、讨论

联合治疗造成兔肝功能的一过性损害，从丙氨酸氨基转移酶损害看，联合治疗的损害较单纯射频和亚砷酸治疗大，但均在正常范围内。对照组肝功能呈逐渐上升趋势，与肿瘤不断增大造成肝脏损害有关，这与范林军等[5]报道的现象相似。

本实验结果提示，射频联合亚砷酸局部治疗能减少兔肝VX2肿瘤的转移，缩小肿瘤的体积，提高荷瘤兔的存活时间，联合治疗具有明显的协同增强作用。B型超声所测结果显示在治疗后第1天肿瘤体积增大，可能因为治疗灶的炎性水肿造成，第3天开始缩小，表明炎症开始消退。对照组肿瘤体积随着时间不断增大，而且在移植肿瘤3周出现腹水。联合治疗后14d发现病灶完全凝固性坏死或肿瘤体积明显减小，与射频组及亚砷酸组相比差异有统计学意义；而且超声发现肿瘤治疗灶中心和周边没有血流信号或明显减少，频谱多普勒未探及血流频谱，单纯射频治疗后肿瘤中心和周边有少量血流信号，在治疗后14d时超声测得肿瘤体积与直视下所得相比差异有统计学意义，可能是超声难以确定肿瘤最小径和最大径以及准确性有关。说明超声仍具有局限性，但仍不失为评价联合治疗效果的好方法。病理学观察结果表明单纯射频治疗后会出现肿瘤残留，尤其是小血管周围，这是肿瘤较联合治疗复发的主要因素。小血管周围出现残留与小血管带走热量，减低热损伤作用有关[6]。而且联合治疗能够产生较多的钙化和脂肪变性，以及更厚的周围纤维间隔，都直观地说明联合治疗能够产生更彻底的毁损作用，从而获得更好的疗效。

射频联合亚砷酸局部治疗能够获得更好的疗效，其机制可能是：射频通过460～500kHz的射频电流，使组织带电粒子振荡摩擦产热而直接毁损病灶[7]，亚砷酸能快速引起组织蛋白质沉淀，产生凝固性坏死[8]，还通过其有效成分三氧化二砷发挥作用[9, 10]。二者联合具有协同增强作用，可能与以下机制有关：首先亚砷酸是电解质，能够离解、增加局部离子量，从而增加射频电流使局部产热增多，而且产热范围也随亚砷酸的弥散而扩大；其次亚砷酸溶液可使射频产生的热传导加快而均匀，减少射频针的炭化，从而扩大治疗范围；再者射频使肿瘤组织凝固，局部血流减少或停滞，亚砷酸较少被血液吸收和带走，滞留于局部，在局部保持较高浓度而发挥缓释作用。

参  考  文  献

1Liang HH, Chen MS, Wang XD, et al. Analysis of the therapeutic efficiency of percutaneous radiofrequency ablation on hepatocellular carcinomas. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2004, 12: 756-757.

梁惠宏,陈敏山,王旭东,等.经皮射频消融治疗不同类型肝癌的疗效分析,中华肝脏病杂志,2004,12:756-757.

2Rhim H, Goldberg SN, Dodd GD 3rd, et al. Essential techniques for successful radio-frequency thermal ablation of malignant hepatic tumors. Radiographics, 2001, 21: S17-S39.

3Wong SL, Edwards MJ, Chao C, et al. Radiofrequency ablation for unresectable hepatic tumors. Am J Surg, 2001, 182: 552-557.

4Carlsson G, Gullberg B, Hafstrom L. Estimation of liver tumor volume using different formulas - an experimental study in rats. J Cancer Res Clin Oncol, 1983, 105: 20-23.

5Fan LJ, He ZP, Ma KS, et al. Reproduction and evaluation of hepatic VX2 tumor model in rabbits. Zhongguo Puwai Jichu Yu Linchuang Zazhi, 2004, 11:45-48. 

范林军,何振平,马宽生,等.兔肝VX2肿瘤移植模型的复制及其意义.中国普外基础与临床杂志,2004，11:45-48.

6Chinn SB, Lee FT Jr, Kennedy GD, et al. Effect of vascular occlusion on radiofreq- uency ablation of the liver:results in a pocine model. AJR Am J Roentgenol,  2001, 176: 789-795.

7Wang XN, Shi JF. Development of the radiatingtherapeutic instrument instrument for livercancr.Yiliao Weisheng Zhuangbei, 2003, 24: 20-21.

王晓宁,史俊富.射频肝癌治疗仪的研制.医疗卫生装备，2003,24:20-21.

8Shah SS, Jacobs DL, Krasinkas AM, et al. Percutaneous ablation of VX2 carcinoma-induced liver tumors with use of ethanol versus acetic acid: pilot study in a rabbit model. J Vasc Interv Radiol, 2004, 15(1 Pt 1): 63-67.

9Akao Y, Yamada H, Nakagawa Y. Aresnic-induced apptosis in malignant cells in vitro. Leuk Lymphoma, 2000, 37: 53-63.

10Ozpolat B, Iopez-Berestein G, Mehta K. ATRA(ouble) in the treantment of acute promyelocytic leukemia. J Biol Regul Hom eost Agents,200l,15:107-122.