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脂多糖Toll样受体4信号通路在乙型肝炎病毒相关的慢加急性肝衰竭发病中的研究进展

作者:段学章 王慧芬 来源: 日期:2010-10-31 21:55:57 人气: 标签:

【关键词】  肝功能衰竭,急性;内毒素类;Toll样受体

The role of LPS/TLR4 interaction on the pathogenesis of acute on chronic liver failure   DUAN Xue-zhang, WANG Hui-fen.

Key wordsLiver failure, acute; Lipopolysaccharide; Toll-like receptors

First author’s address   Liver Failure Treatment and Research Center, the 302nd Military Hospital, Beijing 100039, China

Corresponding author: WANG Hui-fen, Email: wanghuifen@ medmail.com.cn

 

慢加急性肝衰竭(acute on chronic liver failure, ACLF)在临床上仍缺少特异有效的治疗方法[1]ACLF及其并发症(出血、感染、肝性脑病、肝肾综合征等)是威胁患者生命的重要问题。现对肠道细菌移位(bacterial translocation, BT)过程中脂多糖(LPS)及其配体引起的免疫学变化及其在ACLF中的发病机制研究作一综述。

1. ACLF中的BT与人体免疫:在ACLF的发病过程中,BT是一个重要的病理现象和诱发因素[2]。由于肠黏膜屏障的功能障碍,肠道细菌可通过肠黏膜屏障,移位到达肠系膜淋巴结,甚至通过门静脉系统到达肝脏,对肝脏造成二次打击。个别的病例,细菌可进入血液系统引起败血症,结果是肝脏内的炎症反应持续并失控,甚至出现系统性的炎症反应综合征,导致肝衰竭的发生[3]。在此过程中,肠道细菌(主要为G-杆菌)的LPS与人体免疫细胞表面的Toll样受体4Toll-like receptor 4TLR4)相互作用,引起机体全身和肝脏局部免疫系统的变化。因此,LPS/TLR4信号通路在ACLF发病过程中起重要作用,研究此信号通路的作用对阐明ACLF的发病机制,寻找新的治疗方法可提供很大的帮助。

人体的免疫细胞通过Toll样受体(TLRs)来识别微生物。TLRs属于先天免疫的类型识别受体,表达于各种细胞如单核/巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞和内皮细胞等。TLRs及其相关的信号途径作为人体的雷达监视系统,能够识别细菌、病毒、真菌、寄生虫等不同微生物表面的病原体相关分子类型。而且,TLRs也能识别人体和其他非微生物类的结构,继而发挥作用。TLRs及其下游信号通路的活化可导致机体内抗微生物的肽类、炎症介质、抗炎症介质的表达(先天免疫),其结果是微生物被消灭、吞噬、凋亡,稍后则发生白细胞的聚集、抗原呈递细胞的抗原提呈和T细胞、B细胞的活化(获得性免疫)。因此,TLRs在人体的先天免疫和获得性免疫中均发挥重要的作用[4]

2. TLRs的分类、活化与致病机制:TLRs分为两类,一类位于细胞表面,包括TLR4/辅助蛋白(MD2TLR1/TLR2TLR6/TLR2,主要识别外来抗原;另一组位于细胞器的内部,包括TLR3TLR7TLR8TLR9,主要识别微生物的核酸(图1)。不同的TLRs与不同的配体结合,有专一性,如TLR2可识别革兰阳性菌的可溶性肽聚糖(sPGN),TLR4识别革兰阴性菌的LPS,而TLR7TLR9则分别识别单链RNA和含有寡聚脱氧核酸的DNA片段。TLRs识别配体后,通过髓样分化因子88myeloid differentiation factor 88MyD88)依赖和非依赖两种信号传导途径, 分别激活核因子(NF-κB和促分裂素原活化蛋白激酶系统的表达, 引起多种细胞因子的释放, 继而激活下游的蛋白分子,然后活化先天性免疫信号,表达各种炎症调节分子,调节各种细胞和组织代谢,而此信号系统的改变可能导致感染和其他疾病的发生。

TLRs的正常活化对于人体预防微生物感染非常重要,过度活化可导致慢性炎症性疾病如糖尿病、肺气肿和其他自身免疫性疾病;活化不足则可能导致许多感染性疾病的发生。因此,能够诱导炎症的TLRs配体可帮助机体清除有害的病原体,而抑制炎症产生的TLRs配体则可治疗某些自身免疫性疾病。目前为止,已将TLRs以及下游的细胞内信号蛋白,作为治疗各种炎性疾病的靶位加以研究,如聚肌胞是TLR3的激动剂,活化TLR3后可用来抗病毒[5]。也开发了许多脂质A的类似物,通过活化TLR4发挥抗细菌和抗病毒的作用[6]

3. TLR4的活化途径及分子机制:TLR4是人体内最早被鉴定的TLRsKoziczak-Holbro[7]发现其结构与果蝇的TLR类似,均为Ⅰ型穿膜蛋白,胞外部分富含亮氨酸重复序列,胞内部分与白细胞介素(IL-1受体相似。后来的研究证实,TLR4LPS相互作用,可使细胞内的NF-κB活化。LPS的识别过程至少包括了四个分子的参与,即LPS结合蛋白、CD14MD2TLR4,见图2

LPS结合蛋白和CD14在此过程中主要负责将LPS转运到TLR4/MD2LPSTLR4/MD2结合后,可导致TLR4的聚集,然后至少两个胞内信号途径活化,一条途径被称为MyD88依赖的信号途径:在此途径中,至少有两个接头分子即MyD88和包含TIR结构域的接头蛋白参与其中,其结果是转录因子NF-κB的早期活化、炎性细胞因子的分泌和Ⅰ型辅助性T细胞样的细胞反应[8]。另一条途径被称为MyD88非依赖的信号途径,需要Toll样受体接头分子-1Toll样受体接头分子-2两种接头分子的参与,活化的是干扰素调节因子-3转录因子,结果产生IFNβ[9]。细菌的LPS主要由三部分构成,即脂质A、核心多糖和侧链O。脂质A是内毒素的主要毒性成分,也是诱导TLR4信号通路的主要成分,已被用于疫苗佐剂活化TLR4,人工合成的缺乏脂肪酸的脂质A可作为TLR4的拮抗剂,降低NF-κB的活化和炎症反应。除LPS外,TLR4也能识别一些微生物蛋白如呼吸道合胞病毒的F蛋白。人体内源性的TLR4配体也很多,包括热休克蛋白家族(HSP22HSP60HSP70和糖蛋白96等;许多组织细胞的降解物也与TLR4的配体有相似性,如纤维联结素、透明质烷等。

目前已证实,人体许多疾病如肺炎、冠心病、肾病及糖尿病等,均有LPS/TLR4信号通路的参与。Janardhan[10]在大鼠的肺炎模型中发现,正常肺组织内检测不到TLR4mRNA表达,但在气管内加入LPS后,TLR4mRNA表达增加并持续36hWestern blot也能检测到组织中TLR4蛋白的表达。免疫组织化学可检测到TLR4不仅分布于气管上皮细胞,也分布于血管内皮细胞。Geng[11]也发现,冠心病患者的外周血单个核细胞表面的TLR4表达增加。

4. ACLF患者LPSTLR4相互作用的特点及机制:BT过程中,LPSTLR4相互作用的特点及机制尚不清楚。有观点认为,两者相互作用可导致免疫系统的活化,Paulos [12]观察到,放疗引起的胃肠道损伤造成了BT,通过LPS/TLR4通路导致了先天性免疫系统的活化,标志是CD11+ CD86++双阳性的树突状细胞活化,还伴有炎性因子如IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)α的释放,而且,获得性免疫也得到强化。如果用希普欣(喹诺酮类药物)抑制肠道菌群,则树突状细胞的活化和针对肿瘤的免疫功能减弱。Muzio[13]也发现,LPS能够增加单核细胞甚至多核白细胞表面的TLR4的表达。相反,有人观察到,暴露于LPS的人腹腔内巨噬细胞TLR4的表达水平下降,其功能被抑制至少24h

ACLF相关的BT中,LPSTLR4相互作用引起的免疫学变化及相关临床资料少,且结论尚不一致。如Xing [14]对不同阶段ACLF患者外周血与慢性肝衰竭患者进行比较研究,主要研究了单核细胞表面的人白细胞抗原-DRTLR4表达情况和单核细胞分泌细胞因子的差别。结果发现,与正常人比较,肝硬化、慢加急性肝衰竭患者单核细胞表面的TLR4表达和单核细胞分泌细胞因子(IL-1β、TNFα、IL-12P70)的功能高于正常人。而Wasmuth[15]观察到:与稳定的肝硬化患者相比,慢加急性肝衰竭患者与败血症患者的体外产生TNFα水平和单核细胞表面的人白细胞抗原-DR表达水平均明显低于普通肝衰竭组患者。他们认为:ACLF患者和败血症患者均有细胞免疫的缺陷,可能使这类患者增加了感染的机会,造成了高病死率。遗憾的是,他们未进行TLR4表达水平的检测,没有动态的研究,也没有原位肝组织内的研究。

5. 问题与展望:ACLF发病过程中,大量免疫细胞,如单核/巨噬细胞,淋巴细胞,树突状细胞、内皮细胞等参与其中,肝细胞本身也有抗原提呈的作用。在发病过程中,由于肠道BT过程中LPS的作用,可能通过LPS/TLR4信号通路激活机体局部或全身的免疫系统,造成级联放大的免疫活化,最后导致失控的系统性炎症反应综合征。但是,ACLF发生过程中,LPS诱导的TLR4表达水平和活化状态并不清楚,是先过度活化,后抑制?还是先抑制,后活化?也有可能为持续性的抑制或活化?在外周血的抑制或活化状态如何?目前这方面的研究很少,但研究结果对不同阶段的ACLF治疗有重要的指导意义。比如,在慢加急性肝衰竭的早期,如果存在TLR4的活化不足,则可以使用某些上调活化的手段;而后期,如果存在有过度的活化,则可以使用相反的手段进行干预。

LPS/TLR4信号途径在ACLF中的研究较少,有以下原因:(1)缺乏大量、均一的临床病例;(2)细胞表面的TLR4检测需要细胞的分离、纯化、多重标记,技术复杂,试剂和设备昂贵;(3)内毒素的临床检测水平不稳定;(4)简单的ACLF动物模型不能反应人体内复杂的免疫特征及变化;(5)肝组织标本难以获取。上述问题的阐明对于揭示LPS/TLR4信号通路在慢加急性肝衰竭发病过程中的作用,以及为预防其发生和发现新的治疗手段可提供新思路。

     

[1]Liver Failure and Artificial Liver Group, Chinese Society of Infectious Diseases, Chinese Medical Association; Severe Liver Diseases and Artificial Liver Group, Chinese Society of Hepatology, Chinese Medical Association. Diagnostic and treatment guidelines for liver failure. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2006, 14: 643-646. (in Chinese)

中华医学会感染病学分会肝衰竭与人工肝学组、中华医学会肝病学分会重型肝病与人工肝学组.肝衰竭诊疗指南.中华肝脏病杂志,2006,14:643-646.

[2]Balzan S, de Almeida Quadros C, de Cleva R, et al. Bacterial translocation: overview of mechanisms and clinical impact. J Gastroenterol Hepatol, 2007, 22: 464-471.

[3]Liu D, Zhang D, Scafidi J, et al. C1 inhibitor prevents Gram-negative bacterial lipopolysaccharide-induced vascular permeability. Blood, 2005, 105: 2350-2355.

[4]Trinchieri G, Sher A. Cooperation of Toll-like receptor signals in innate immune defence. Nat Rev Immunol, 2007, 7: 179-190.

[5]Ashkar AA, Yao XD, Gill N, et al. Toll-like receptor (TLR)-3, but not TLR4, agonist protects against genital herpes infection in the absence of inflammation seen with CpG DNA. J Infect Dis, 2004, 190: 1841-1849.

[6]Cluff CW, Baldridge JR, Stover AG, et al. Synthetic toll-like receptor 4 agonists stimulate innate resistance to infectious challenge. Infect Immun, 2005, 73: 3044-3052.

[7]Koziczak-Holbro M, Gluck A, Tschopp C, et al. IRAK-4 kinase activity-dependent and -independent regulation of lipopolysaccharide-inducible genes. Eur J Immunol, 2008, 38: 788-796.

[8]Zughaier SM, Zimmer SM, Datta A, et al. Differential induction of the toll-like receptor 4-MyD88-dependent and -independent signaling pathways by endotoxins. Infect Immun, 2005, 73: 2940-2950.

[9]Jiang Z, Georgel P, Du X, et al. CD14 is required for MyD88-independent LPS signaling. Nat Immunol, 2005, 6: 565-570.

[10]Janardhan KS, McIsaac M, Fowlie J, et al. Toll like receptor-4 expression in lipopolysaccharide induced lung inflammation. Histol Histopathol, 2006, 21: 687-696.

[11]Geng HL, Lu HQ, Zhang LZ, et al. Increased expression of Toll like receptor 4 on peripheral-blood mononuclear cells in patients with coronary arteriosclerosis disease. Clin Exp Immunol, 2006, 143: 269-273.

[12]Paulos CM, Wrzesinski C, Kaiser A, et al. Microbial translocation augments the function of adoptively transferred self/tumor-specific CD8+ T cells via TLR4 signaling. J Clin Invest, 2007, 117: 2197-2204.

[13]Muzio M, Bosisio D, Polentarutti N, et al. Differential expression and regulation of toll-like receptors (TLR) in human leukocytes: selective expression of TLR3 in dendritic cells. J Immunol, 2000, 164: 5998-6004.

[14]Xing T, Li L, Cao H, et al. Altered immune function of monocytes in different stages of patients with acute on chronic liver failure. Clin Exp Immunol, 2007, 147: 184-188.

[15]Wasmuth HE, Kunz D, Yagmur E, et al. Patients with acute on chronic liver failure display "sepsis-like" immune paralysis. J Hepatol, 2005, 42: 195-201.

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