肝纤维化发生的中心环节是肝星状细胞的激活、增殖、转化为成纤维样细胞并合成、分泌大量细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ECM），沉积于肝组织。研究证实，目前已知的最重要的致纤维化生成因子是转化生长因子β1（TGF-β1），它不但可直接促进ECM的生成，并可通过基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)等阻止ECM的降解，促进肝纤维化的形成与发展。本文通过慢性肝炎患者血清及肝组织TGF-β1和TIMP-1检测，探讨TGF-β1和TIMP-1在慢性肝炎肝纤维化中的作用。
材料与方法
一、研究对象
65例慢性肝炎患者均为2003年9月～2005年10月本院门诊就诊或住院的患者，其中男48例，女17例，年龄22～48岁。根据2000年“病毒性肝炎防治方案”［1］诊断为慢性乙型肝炎。所有患者均排除其它病毒感染史和其它原因导致的肝脏疾病及其它系统疾病，无肝穿刺活检禁忌证。血清学检测正常对照20例，为本院体检健康者。肝组织病理学检测正常对照16例为以往未患过肝脏病变且肝功能正常者。
二、研究方法
肝组织TGF-β1和TIMP-1检测采用免疫组化染色两步法，兔抗人多克隆TGF-β1和TIMP-1抗体购自Santa Cruz Biotechnology.Inc.。血清TGF-β1和TIMP-1检测系所有患者均在清晨空腹抽取肘静脉血,采用ELISA法测定血清TGF-β1和TIMP-1，试剂盒购自深圳晶美生物有限公司。
三、统计学处理
血清学检测采用SPSS10.0软件进行定量资料方差分析，免疫组化学检测应用HPIAS1000高清晰彩色病理图文报告分析系统进行病理半定量分析。
结果
一、 血清TGF-β1和TIMP-1检测结果见表1（略）：
从表1中可以看出65例慢性乙型肝炎患者血清中TGF-β1 和TIMP-1的水平明显高于正常对照组（P＜0.01)。
二、 肝组织病理TGF-β1和TIMP-1检测结果见表2（略）
从表2中可以看出65例慢性乙型肝炎患者血肝组织中TGF-β1 和TIMP-1的含量明显高于正常对照组（P＜0.01)。
三、 患者肝组织病理纤维化分期和血清TGF-β1和TIMP-1结果见表3（略）
表3显示：血清TGF-β1和TIMP-1的水平随着肝组织纤维化程度的加重而不断升高，Spearman相关分析也显示呈正相关，r分别为 0.89，0.87。图1（略）图2（略）
讨论
活化的肝星状细胞（HSC）是肝纤维化时细胞外基质产生的主要细胞。TGFβ1是一组具有多种生物学功能的蛋白多肽,其可激活静息状态的HSC，后者进而转化为成纤维样细胞并导致HSC增殖、产生胶原，同时活化的HSC能自分泌ＴＧＦ β1，是肝纤维化后期ＴＧＦ β1的主要来源,导致ECM不断产生。TGFβ家族功能具有双向性，一方面对间质细胞有促进增殖作用，另一方面又对肝细胞生长有抑制作用，致使肝细胞受损后不能再生，有利于炎症细胞进一步浸润及间质细胞增殖。此外，还有证据表明受损的肝细胞能产生ＴＧＦ β1，从而使肝细胞损伤不断加重［3-5］。
TIMPs在组织中的主要作用是通过与基质金属蛋白酶（MMPs）1∶1比例的结合而抑制MMPs的活性。从而阻止ＥＣＭ的降解，形成或促进肝纤维化。目前已发现的TIMPs有4种，在判定肝纤维化及肝组织学改变方面，TIMP-1的意义较大。激活的ＨＳＣ使TIMP1表达增强［67］，ＴＧＦ β1能增加蛋白酶抑制剂的表达，从而拮抗MMPs的作用，引起ECM分解减少、沉积增加。故临床上检测慢性肝病患者血清或肝组织中TGF-β1含量的变化，有助于了解肝脏病变的严重程度。
我们对65例慢性乙型肝炎患者血清中TGF-β1含量检测的结果显示，与正常对照组相比，其含量显著增加（P<0.01），而且，其升高与肝纤维化严重程度一致。我们对这些患者肝组织学检查的结果也同时表明，与正常对照组相比，TGF-β1的表达明显增强（P<0.01），如图1（略），可见间质细胞中TGF-β1的显著表达。
目前发现在病损肝脏中TIMP-1明显增高，出现的时间较早，表达较强。因此，越来越多的研究人员把它看作是肝纤维化的诊断指标［8］。我们对65例慢性乙型肝炎患者血清中TIMP-1含量的检测结果也显示，其含量显著比正常对照组增加（P<0.01），其升高的水平与肝纤维化严重程度呈正相关。我们同时也检测了这些患者肝组织中TIMP-1的表达，结果与正常对照组相比，TIMP-1的表达明显增高（P<0.01），如图2（略），可见TIMP-1在间质细胞中的表达增多。
我们的结果表明，慢性肝炎肝纤维化过程中，与肝组织的表达相应，患者血清中TGF-β1和TIMP1含量显著增加，是血清学诊断肝纤维化的重要指标。
参考文献
1中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案. 中华肝脏病杂志. 2000，8∶324-329.
2中华肝脏病学会肝纤维化学组.肝纤维化诊断及疗效评估共识.中华肝脏病杂志,2002,10∶327-328.
3Bodes P, Parades V. Transforming growth factorβ: a keyrole in liver fibrogenesis. J Hepatol, 1995,22(Suppl.2)∶37.
4Demirci G, Nasha B, Pichlmayr R, et al. Fibrosis in chronic rejection of human liver allografts: expression patterns of transforming growth factor：TGFbeta1 and TGFbeta3 ［J］.Transplanation,1996,62(12)∶1776〔23〕.
5EghbaliFatourechi G, SieckG C, Prakash YS, et al. TypeⅠprocollagen production and proliferation ismediated by transforming growth factorβ in a model of hepatic fibrosis ［J］.Endocrinology,1996,137(5)∶18793.
6Murawaki Y, Ikuta Y, Kawasaki H. Clinical usefulness of serum tissue inhibitor of metalloproteinase2 assay in patients with chronic liver disease in comparison with serum TIMP-1 ［J］.Clin Chim Acta,1999,281(12)∶109〔19〕.
7谢玉梅,聂青和,周永兴,等.肝硬化患者肝组织中TIMP-1、TIMP2的表达［J］.第四军医大学学报,2000,21(7)∶790.
8聂青和.肝硬化.见:李梦东,王宇明,主编.实用传染病学.第三版,北京:人民卫生出版社,2004∶1439-1452.
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