【摘要】 目的 观察以腺相关病毒（AAV）为载体，含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-1的反义RNA及小干扰RNA（siRNA）的重组AAV（rAAV/ANTI-TIMP-1/neo及rAAV/siRNA-TIMP-1/neo）感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后，TIMP-1表达的受抑制情况。 方法 经聚合酶链反应（PCR）扩增及酶切后连接，将针对TIMP-1的反义RNA片段及siRNA片段分别构建于AAV载体中并测序鉴定，将其包装成重组病毒后感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6，同时设空白对照组。经G418以400μg/ml的浓度筛选30d后，分别应用荧光定量PCR技术及Western blot检测重组病毒感染组及空白对照组HSC-T6 TIMP-1的基因转录及蛋白质表达水平。 结果 经PCR、酶切及序列测定证实，两种重组AAV载体质粒（pdl6-95/ANTI-TIMP-1/neo和pdl6-95/siRNA-TIMP-1/neo）克隆成功。将重组质粒包装成病毒感染HSC-T6细胞30d后，通过荧光定量PCR技术及Western blot分析显示，重组病毒rAAV/siRNA-TIMP-1/neo组与对照组细胞相比，HSC-T6中的TIMP-1基因的转录被抑制（P<0.01）,且表达水平与对照组相比约下降60％；而rAAV/ANTI-TIMP-1/neo组及空载体组与对照组相比TIMP-1基因的转录及表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 通过AAV载体技术重组病毒rAAV/siRNA-TIMP-1/neo可有效地抑制TIMP-1基因的表达,而针对TIMP-1基因全长的重组病毒rAAV/ANTI-TIMP-1/neo对体外培养的HSC-T6细胞TIMP-1基因的转录与表达无明显抑制作用。 【关键词】 金属蛋白酶组织抑制因子-1； RNA，反义； 小干扰RNA； 腺相关病毒； 肝星状细胞
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